pcr儀使用方法
pcr儀具體應(yīng)如何使用呢？以下小編為您詳細(xì)說明：
（1）向一微量離心管中依次加入
dna模板102-105拷貝
引物 各1μmol/l
dntp各200μmol/l
10×pcr緩沖液1/10體積
ddh2o補(bǔ)到終體積（終體積50μl-100μl）
（1）混勻后，離心15s使反應(yīng)成分集于管底。以上步驟僅在實(shí)驗(yàn)研究用，現(xiàn)在商品化試劑已將dntp、10×pcr緩沖液，引物，ddh2o混合在一起，反應(yīng)體積為20-25μl，只要試驗(yàn)人員加入處理好的樣品就可以了。
（2）加石蠟油50-100μl于反應(yīng)液表面以防蒸發(fā)。置反應(yīng)管于97℃變性10min。
（3）冷至延伸溫度時(shí)，加入1-5u taq dna聚合酶，離心30s使酶和反應(yīng)液充分混合?，F(xiàn)在臨床使用試劑酶通常已加入反應(yīng)液中。
（4）pcr儀的循環(huán)程序?yàn)椋?4℃變性30s，55℃退火20s，然后在72℃延伸30s，共循環(huán)30-35次。最后一次循環(huán)結(jié)束后，再將反應(yīng)管置72℃溫育5min，以確保充分延伸。
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